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ELISA測定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式,測定操作非常簡單,一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、大鼠ELISA試劑盒洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報告及解釋等方面,其中任一步驟的不當(dāng)都會影響測定結(jié)果,且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。
盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單,但有可能會影響測定結(jié)果的因素卻較多,分布在測定操作的各步之中,尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現(xiàn)問題的可能原因,特對常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。ELISA測定中可能會出現(xiàn)的問題及可能的原因問題可能的原因(非試劑盒本身的原因)
1.弱陽性質(zhì)控樣本檢測不出 溫育的時間或溫度不夠;顯色反應(yīng)時間太短;所用配制緩沖液的蒸餾水有問題
2.大鼠ELISA試劑盒測定的重復(fù)性差 (相同樣本兩次測定結(jié)果不一致) 這是典型的由測定操作引起的問題,包括
(1)加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致;(2)加樣過快,孔間發(fā)生污染;