我們知道，在原代細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)儀器等工作上都要耗費(fèi)不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了原代細(xì)胞保存這個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟，將暫時(shí)多出來(lái)的原代細(xì)胞冰凍保存，保存細(xì)胞活力。

原代細(xì)胞復(fù)蘇是一個(gè)簡(jiǎn)單的試驗(yàn)操作，但操作中也有許多需要注意的事項(xiàng)，在實(shí)驗(yàn)操作中注意細(xì)小的問(wèn)題，才能使復(fù)蘇后的細(xì)胞保持良好的狀態(tài)，針對(duì)原代細(xì)胞復(fù)蘇應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：

1. 可以提前把需要的體積的培養(yǎng)液放到培養(yǎng)瓶里，擰松瓶蓋，放到孵箱里30分鐘--1個(gè)小時(shí)； 

2. 為防止凍存管在升溫時(shí)出現(xiàn)爆裂等情況，可以在放入水浴前就把超凈臺(tái)里的蓋子擰松一下然后再擰上；

3. 水浴溫度37℃左右。

一、慢凍程序

1.  標(biāo)準(zhǔn)程序：采用細(xì)胞凍存器

當(dāng)溫度在-25 ℃以上時(shí)，1~2 ℃/min；

當(dāng)溫度達(dá)-25 ℃以下時(shí)，5~10 ℃/min；

當(dāng)溫度達(dá)-100℃時(shí)，可迅速放入液氮中。

2.  簡(jiǎn)易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內(nèi)，紗布袋系以線(xiàn)繩，通過(guò)線(xiàn)繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2 ℃的速度，在40 min內(nèi)降至液氮表面過(guò)夜，次日早晨投人液氮中。

3.  傳統(tǒng)程序：冷凍管置于4℃ 10 分鐘→ -20℃ 30 分鐘→ -80℃ 16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

二、低溫保護(hù)劑的應(yīng)用

在細(xì)胞凍存時(shí)加入溫保護(hù)劑，能大大提高凍存效果。

常用的低溫保護(hù)劑是DMSO，它是一種滲透性保護(hù)劑，可迅速透入細(xì)胞，提高胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn)，延緩凍結(jié)過(guò)程，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內(nèi)冰晶，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。

三、保存細(xì)胞的復(fù)蘇方法

1.  快速解凍

凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1 分鐘內(nèi)全部融化（不要超過(guò)3 分鐘）。

2.  解凍后的細(xì)胞可直接接種到生長(zhǎng)培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)后再用新鮮培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。

3.  如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感

解凍后的原代細(xì)胞應(yīng)先通過(guò)離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。

上海研域生物應(yīng)保證清潔，整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸，并可以使實(shí)驗(yàn)中用到的“花板"降至限度。從而提高檢測(cè)的特異性，并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。